凯发k8国际都知道，细胞凋亡检测有很多种方法，常见的就有Caspase活性检测、Annexin V检测、线粒体膜电位检测、TUNEL检测等。但是吧，因为细胞发生凋亡时，不同时期在不同区域（如细胞膜、细胞浆、线粒体、细胞核等）会发生不同的生理生化改变。所以，凯发k8国际针对不同时期的细胞凋亡检测要采用不同的方法。

今天，凯发k8国际就和湖南长沙细胞实验外包公司凯发k8国际生物一起来看看如何用线粒体膜电位法（JC-1）检测细胞凋亡吧。

线粒体膜电位法（JC-1）检测细胞凋亡实验原理：

JC-1是一种用于检测线粒体膜电位的理想荧光探针。正常生理状态下，线粒体负电性高，JC-1进入线粒体以多聚体存在，红色荧光强，细胞凋亡时，线粒体去极化产生，负电性降低，JC-1则以单体存在细胞质，绿色荧光增强。

但是，湖南长沙细胞实验外包公司凯发k8国际生物提醒，这种方法不能区分细胞凋亡或其他原因导致的线粒体膜电位的变化。

线粒体膜电位法（JC-1）检测细胞凋亡实验步骤：

1、JC-1染色工作液的配制：

六孔板每孔所需JC-1染色工作液的量为1ml，其它培养器皿的JC-1染色工作液的用量以此类推；对于细胞悬液每50-100万细胞需0.5ml JC-1染色工作液。取适量JC-1，并用超纯水稀释。剧烈Vortex充分溶解并混匀JC-1。然后再加JC-1染色缓冲液，混匀后即为JC-1染色工作液。

2、阳性对照的设置：

把CCCP按比例加入到细胞培养液中，处理细胞20分钟。随后装载JC-1，进行线粒体膜电位的检测。湖南长沙细胞实验外包公司凯发k8国际生物提醒，对于特定的细胞，CCCP的作用浓度和作用时间可能有所不同，需自行参考相关文献资料确定。

对于悬浮细胞：

（1）取10-60万细胞，重悬于0.5ml细胞培养液中，细胞培养液中可以含血清和酚红。

（2）加入0.5ml JC-1染色工作液，颠倒数次混匀。细胞培养箱中37℃孵育20分钟。

（3）在孵育期间，配制适量的JC-1染色缓冲液，并放置于冰浴。

（4）37℃孵育结束后， 600g，4℃，离心3-4分钟，沉淀细胞。弃上清，湖南长沙细胞实验外包公司凯发k8国际生物提醒，注意尽量不要吸除细胞。

（5）用JC-1染色缓冲液洗涤2次：加入1ml JC-1染色缓冲液重悬细胞，600g，4℃，离心3-4分钟，沉淀细胞，弃上清。再加入1ml JC-1染色缓冲液重悬细胞，600g，4℃，离心3-4分钟，沉淀细胞，弃上清。

（6）再用适量JC-1染色缓冲液重悬后，用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察，也可以用荧光分光光度计检测或流式细胞仪分析。

以上就是线粒体膜电位法（JC-1）检测细胞凋亡实验的详细步骤了，具体的实验步骤可能会因实验条件和实验需求而有所不同。但是值得提醒的是，当自己时间紧，设备不完善时，选择一家专业又靠谱的细胞外包实验公司可以事半功倍，那么细胞实验外包公司哪家好呢？哪家细胞实验外包公司更靠谱呢？更值得推荐呢？

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